Дегенерация яйцеклетки после ИКСИ: причины повреждения

Дегенерация яйцеклетки после ИКСИ: почему ооцит мог повредиться?​

Дегенерация после ИКСИ означает, что яйцеклетка не сохранила жизнеспособность после проведения процедуры. Повреждение может стать заметным непосредственно во время введения сперматозоида или позднее - при контрольном осмотре в день проверки оплодотворения. Единичная дегенерировавшая яйцеклетка встречается даже при правильно выполненном ИКСИ и не доказывает ошибку эмбриолога. Ооциты отличаются по зрелости, состоянию цитоплазмы и устойчивости клеточной мембраны. Некоторые клетки оказываются особенно хрупкими и плохо переносят необходимые лабораторные манипуляции.
Если повредилась значительная часть зрелых яйцеклеток или ситуация повторилась в нескольких протоколах, результат необходимо подробно разобрать с эмбриологом.

Что означает «дегенерация ооцита»?​

Дегенерацией называют потерю яйцеклеткой жизнеспособности. Такая клетка больше не может нормально оплодотвориться, делиться и стать эмбрионом.

В эмбриологическом листе могут встречаться разные формулировки:

• дегенерация ооцита;
• ооцит дегенерировал;
• повреждение после ИКСИ;
• дегенерация после инъекции;
• ооцит не пережил ИКСИ;
• DEG;
• дегенеративные изменения;
• лизис ооцита.

Формулировки могут отличаться между клиниками. Поэтому полезно уточнить, когда именно было обнаружено повреждение и включила ли лаборатория эту клетку в показатель дегенерации после ИКСИ.

На каком этапе яйцеклетка может повредиться?​

Ооцит проходит несколько лабораторных этапов:

1. получение во время пункции;
2. удаление окружающих клеток - денудация;
3. оценка зрелости;
4. подготовка к ИКСИ;
5. введение выбранного сперматозоида;
6. перенос в культуральную среду;
7. проверка оплодотворения на следующие сутки.

Повреждение может быть обнаружено на разных этапах.

До проведения ИКСИ
Иногда яйцеклетка уже при получении имеет выраженные дегенеративные изменения. Такая клетка могла утратить жизнеспособность ещё внутри фолликула либо плохо перенести пункцию и последующую обработку.

Во время денудации
Для оценки зрелости с яйцеклетки удаляют окружающие её клетки. Процедура включает ферментативную обработку и осторожное перемещение через специальные пипетки. Чрезмерное механическое воздействие способно повредить ооцит, хотя при соблюдении лабораторной техники это происходит редко.

Непосредственно во время ИКСИ
Для введения сперматозоида эмбриолог должен пройти через наружную оболочку и мембрану яйцеклетки. Иногда мембрана не восстанавливает целостность после процедуры, и клетка дегенерирует.

После ИКСИ
Сразу после процедуры яйцеклетка может выглядеть сохранной, но признаки повреждения становятся заметны через несколько часов или во время проверки оплодотворения. Такие случаи также обычно относят к дегенерации, связанной с ИКСИ.

Как проводится ИКСИ?​

ИКСИ - это введение одного выбранного сперматозоида непосредственно внутрь зрелой яйцеклетки.

Эмбриолог:

• определяет зрелые ооциты стадии MII;
• выбирает подходящий жизнеспособный сперматозоид;
• фиксирует яйцеклетку специальной удерживающей пипеткой;
• располагает полярное тельце вдали от места введения;
• проходит через оболочку и мембрану ооцита;
• вводит сперматозоид с минимальным объёмом среды;
• переносит яйцеклетку в условия дальнейшего культивирования.

Это точная микроманипуляция, но она неизбежно предполагает воздействие на клетку. Большинство зрелых яйцеклеток сохраняют жизнеспособность, однако полностью исключить повреждение невозможно.

Почему яйцеклетка могла дегенерировать после ИКСИ?​

Причины условно можно разделить на особенности самого ооцита, лабораторные факторы и сочетание нескольких обстоятельств.

1. Хрупкость мембраны яйцеклетки
Мембрана ооцита называется оолеммой. У разных яйцеклеток она может отличаться по эластичности и реакции на прикосновение инъекционной пипетки.

Иногда оолемма:

• легко повреждается;
• не восстанавливает целостность после ИКСИ;
• реагирует на процедуру не так, как ожидалось;
• оказывается необычно жёсткой или, наоборот, слишком податливой.

Эти особенности нельзя всегда надёжно определить до начала ИКСИ.

2. Внутренние особенности ооцита
Внешне зрелая яйцеклетка MII не обязательно полностью созрела функционально. Ядро и цитоплазма могут созревать не одновременно.

На устойчивость клетки потенциально влияют:

• состояние цитоплазмы;
• качество клеточных структур;
• энергетические возможности клетки;
• степень цитоплазматического созревания;
• некоторые морфологические особенности;
• нарушения, которые невозможно увидеть под обычным микроскопом.

Поэтому обозначение MII подтверждает определённую стадию зрелости, но не гарантирует, что яйцеклетка легко перенесёт ИКСИ.

3. Перезрелость или неполная зрелость

Для ИКСИ должны использоваться зрелые яйцеклетки. Однако клетки, полученные из разных фолликулов, могут находиться на неодинаковых стадиях внутреннего созревания.

Ооцит может иметь полярное тельце и формально относиться к MII, но при этом быть:

• недостаточно зрелым функционально;
• поздно дозревшим после пункции;
• перезревшим;
• несинхронно созревшим.

Такие клетки иногда хуже переносят микроманипуляцию.

4. Особенности ответа на стимуляцию

Схема стимуляции сама по себе не позволяет определить точную причину дегенерации. Однако особенности роста фолликулов, созревания ооцитов и реакции яичников могут влиять на неоднородность полученной группы яйцеклеток.

Важно оценивать:

• равномерность роста фолликулов;
• время введения триггера;
• интервал между триггером и пункцией;
• количество полученных ооцитов;
• долю зрелых клеток MII;
• морфологические комментарии эмбриолога.

Исследования не дают основания автоматически объяснять дегенерацию конкретным препаратом или протоколом стимуляции.

5. Механическое воздействие при денудации
Перед ИКСИ яйцеклетки освобождают от окружающих клеток. Современные рекомендации предусматривают минимальное воздействие фермента, подходящий размер пипеток и осторожное перемещение ооцитов. Если яйцеклетка изначально хрупкая, даже стандартная денудация может оказаться для неё значительной нагрузкой.

6. Технические особенности проведения ИКСИ
На сохранность ооцита могут влиять:

• размер и состояние инъекционной пипетки;
• место введения;
• положение полярного тельца;
• способ прохождения оолеммы;
• объём среды, попавшей внутрь клетки;
• количество дополнительных движений;
• время нахождения ооцита вне инкубатора;
• опыт и индивидуальная техника оператора.

Это не означает, что любой повреждённый ооцит является следствием технической ошибки. Лаборатория оценивает показатель дегенерации на серии процедур, потому что по одному ооциту отделить технический фактор от биологических особенностей клетки обычно невозможно.

7. Условия лабораторной среды

Яйцеклетки чувствительны к условиям обработки. Лаборатория должна поддерживать:

• стабильную температуру;
• подходящую кислотность среды;
• необходимую осмолярность;
• минимальное воздействие света;
• короткое время манипуляций;
• качество культуральных сред и расходных материалов;
• защиту оборудования от вибрации.

Отклонения потенциально способны повышать нагрузку на клетки. Однако определить нарушение условий по одному случаю дегенерации нельзя.

8. Особенности размороженных яйцеклеток

После размораживания яйцеклетки обычно оплодотворяют методом ИКСИ. При этом важно разделять два события:

• ооцит не пережил размораживание;
• ооцит пережил размораживание, но дегенерировал после ИКСИ.

Это разные показатели. В выписке должно быть указано, сколько яйцеклеток разморозили, сколько сохранили жизнеспособность и скольким выполнили ИКСИ.

Может ли сперматозоид повредить яйцеклетку?​

Выбранный сперматозоид вводится внутрь ооцита с помощью специальной пипетки. Непосредственная механическая дегенерация обычно связана с реакцией яйцеклетки на процедуру введения, а не с тем, что сперматозоид самостоятельно «разрушил» её.

При этом особенности сперматозоида могут иметь значение для других этапов:

• активации яйцеклетки;
• формирования пронуклеусов;
• нормального оплодотворения;
• начала деления;
• дальнейшего развития эмбриона.

Поэтому дегенерация после инъекции и отсутствие оплодотворения из-за нарушения активации - не одно и то же.

Дегенерация и отсутствие оплодотворения - это одно и то же?​

Нет. Это разные результаты.

Дегенерация означает, что яйцеклетка утратила жизнеспособность.

Отсутствие оплодотворения означает, что ооцит сохранился, но при проверке не были подтверждены стандартные признаки нормального оплодотворения.

В эмбриологическом листе могут быть указаны:

• 2PN - два пронуклеуса, стандартный признак нормального оплодотворения;
• 0PN - пронуклеусы при осмотре не обнаружены;
• 1PN - обнаружен один пронуклеус;
• 3PN - обнаружены три пронуклеуса;
• DEG - дегенерация;
• NF - отсутствие подтверждённого оплодотворения.

Если в выписке написано только «не оплодотворилась», следует уточнить, сохранилась ли яйцеклетка или дегенерировала.

Как рассчитывается процент дегенерации после ИКСИ?​

Показатель рассчитывают от количества инъецированных яйцеклеток, а не от всех ооцитов, полученных во время пункции.

Формула:

Количество яйцеклеток, повреждённых во время ИКСИ или обнаруженных дегенерировавшими при проверке ÷ количество инъецированных ооцитов × 100%.

Пример:

• во время пункции получили 12 ооцитов;
• зрелыми MII оказались 9;
• ИКСИ провели всем 9 зрелым клеткам;
• после процедуры дегенерировала 1 яйцеклетка.

Расчёт:

1 ÷ 9 × 100% = около 11%.
Считать одну дегенерировавшую клетку от всех 12 полученных ооцитов неправильно, потому что трём яйцеклеткам ИКСИ не проводилось.

Какой процент дегенерации считается допустимым?​

В публикациях встречаются разные показатели дегенерации после ИКСИ - приблизительно от 5% до 19%. Такой широкий диапазон связан с различиями между пациентами, лабораториями и правилами учёта повреждённых клеток.

В Венском консенсусе целевое значение для лабораторного контроля находилось в диапазоне от 0% до 10%. Это показатель для анализа работы лаборатории на большом количестве инъецированных яйцеклеток, а не строгая индивидуальная норма для каждой пациентки.

При небольшом числе ооцитов процент особенно легко вводит в заблуждение:

• 1 из 2 - 50%;
• 1 из 3 - около 33%;
• 1 из 5 - 20%;
• 1 из 10 - 10%;
• 1 из 20 - 5%.

Во всех примерах дегенерировала одна яйцеклетка, но процент различается в десять раз. Поэтому необходимо учитывать одновременно количество клеток и долю повреждения.

Одна дегенерировавшая яйцеклетка - это много?​

Обычно единичный случай не позволяет говорить о серьёзной проблеме. Если ИКСИ провели десяти зрелым яйцеклеткам и одна дегенерировала, показатель составляет 10%. Остальные девять клеток продолжают оценивать отдельно.
Если зрелых ооцитов было два и один дегенерировал, потеря составляет 50%. Для конкретного протокола это существенно, однако такое малое количество клеток не позволяет достоверно оценить общую тенденцию или работу лаборатории.
Чем меньше получено яйцеклеток, тем важнее смотреть не только на процент, но и на судьбу каждой оставшейся клетки.

Когда дегенерация требует подробного разбора?​

Обсудить ситуацию с эмбриологом особенно важно, если:

• дегенерировало несколько зрелых яйцеклеток;
• повредилась значительная часть инъецированных ооцитов;
• дегенерация повторилась в двух или нескольких протоколах;
• эмбриолог отметил необычную хрупкость мембран;
• во время процедуры возникали технические сложности;
• ранее наблюдалась дегенерация при использовании собственных яйцеклеток;
• подобная ситуация повторилась с другим эмбриологом или в другой лаборатории;
• одновременно оказалось мало зрелых яйцеклеток;
• наряду с дегенерацией получено очень низкое оплодотворение;
• не сохранилась ни одна инъецированная яйцеклетка.

По одному протоколу точную причину установить удаётся не всегда. Особенно трудно сделать вывод, если для ИКСИ была доступна только одна или две яйцеклетки.

Означает ли дегенерация плохое качество всех яйцеклеток?​

Нет. Ооциты одного цикла не являются полностью одинаковыми. Одна клетка может оказаться хрупкой, а остальные - нормально оплодотвориться и продолжить развитие.

Единичная дегенерация не означает, что:

• все полученные яйцеклетки плохого качества;
• оставшиеся эмбрионы обязательно остановятся;
• беременность в этом протоколе невозможна;
• следующий протокол повторится точно так же;
• женщина больше не сможет получить жизнеспособные ооциты.

Исследование циклов ИКСИ показало, что наличие отдельных дегенерировавших ооцитов само по себе не позволяло предсказать снижение совокупной вероятности рождения ребёнка. Однако итог конкретного протокола зависит от количества оставшихся клеток, нормального оплодотворения и развития эмбрионов.

Означает ли дегенерация ошибку эмбриолога?​

Не обязательно. Повреждение может быть связано как с особенностями яйцеклетки, так и с техническими обстоятельствами. По одной дегенерировавшей клетке установить причину невозможно.

Для контроля лаборатория должна учитывать:

• общий процент повреждения после ИКСИ;
• показатели каждого оператора;
• частоту дегенерации за определённый период;
• результаты после смены расходных материалов;
• качество среды и оборудования;
• случаи необычно высокой дегенерации;
• характеристики групп пациенток.

Если в одном цикле повредилась большая часть яйцеклеток, пациентка вправе получить подробное объяснение, копию эмбриологического протокола и информацию о том, проводился ли внутренний разбор случая.

Можно ли спасти дегенерировавшую яйцеклетку?​

Нет. Если эмбриолог подтвердил потерю жизнеспособности ооцита, восстановить его, повторно провести ИКСИ или получить из него эмбрион невозможно. При этом важно убедиться, что речь действительно идёт о дегенерации. Обозначения 0PN, отсутствие оплодотворения и остановка развития относятся к другим ситуациям и требуют отдельного объяснения.

Можно ли предотвратить дегенерацию в следующем протоколе?​

Полностью исключить риск нельзя. Возможная тактика зависит от результатов предыдущего протокола.

Команда клиники может проанализировать:

• схему и длительность стимуляции;
• размеры фолликулов перед триггером;
• вид и время введения триггера;
• интервал до пункции;
• долю зрелых яйцеклеток;
• время проведения денудации и ИКСИ;
• морфологию ооцитов;
• особенности поведения оолеммы;
• технику введения;
• результаты разных операторов;
• оплодотворение и развитие оставшихся клеток;
• результаты предыдущих циклов.

Иногда лаборатория может изменить отдельные технические параметры проведения ИКСИ. В некоторых центрах применяются другие способы прохождения оболочки ооцита, но их доступность и целесообразность необходимо обсуждать индивидуально. Самостоятельно выбирать новую схему стимуляции или дополнительные эмбриологические методы по одному случаю дегенерации не следует.

Поможет ли искусственная активация ооцитов?​

Искусственная активация направлена на запуск процессов оплодотворения после введения сперматозоида. Она не восстанавливает уже дегенерировавшую яйцеклетку и не является стандартным способом профилактики механического повреждения при ИКСИ.

Метод рассматривают прежде всего при:

• предыдущем полном отсутствии нормального оплодотворения;
• очень низком оплодотворении - менее 30%;
• глобозооспермии.

Дегенерация и нарушение активации - разные проблемы. Поэтому назначение активации только из-за одной повреждённой яйцеклетки обычно не имеет достаточного обоснования.

Какие вопросы задать эмбриологу?​

После получения эмбриологического результата можно спросить:

• Сколько ооцитов было получено?
• Сколько яйцеклеток были зрелыми MII?
• Скольким клеткам выполнили ИКСИ?
• Сколько ооцитов дегенерировало?
• Когда обнаружили повреждение - до ИКСИ, во время процедуры или при проверке оплодотворения?
• Как лаборатория рассчитала процент дегенерации?
• Отмечались ли особенности оболочки или цитоплазмы яйцеклеток?
• Была ли мембрана необычно хрупкой или жёсткой?
• Возникали ли технические сложности во время ИКСИ?
• Один эмбриолог проводил ИКСИ всем клеткам?
• Сколько оставшихся яйцеклеток нормально оплодотворились и имели 2PN?
• Как развиваются полученные эмбрионы?
• Соответствует ли показатель дегенерации обычным результатам лаборатории?
• Проводился ли внутренний разбор этого случая?
• Нужно ли менять тактику в следующем протоколе?

Желательно получить эмбриологический лист, где отдельно указаны полученные ооциты, зрелые MII, инъецированные клетки, дегенерация, нормальное оплодотворение и дальнейшее развитие.

FAQ​

Из десяти яйцеклеток одна дегенерировала после ИКСИ - это нормально?

Если ИКСИ провели всем десяти клеткам, показатель составляет 10%. Единичная дегенерация может встречаться даже при корректно проведённой процедуре. Важны оплодотворение и дальнейшее развитие остальных девяти ооцитов.

Из трёх яйцеклеток одна не пережила ИКСИ - это очень много?

Для конкретного протокола потеря существенная: одна из трёх составляет около 33%. Но при таком небольшом количестве ооцитов результат не позволяет надёжно судить о качестве всей группы яйцеклеток или работе лаборатории.

Почему ооцит сначала выглядел нормальным, а затем дегенерировал?

Некоторые повреждения становятся заметны не сразу. Яйцеклетка может внешне сохраняться после процедуры, а признаки потери жизнеспособности обнаруживаются через несколько часов или при проверке оплодотворения.

Может ли яйцеклетка дегенерировать ещё до ИКСИ?

Да. Дегенеративные изменения иногда обнаруживаются после пункции или денудации. Такой случай необходимо учитывать отдельно от повреждения непосредственно после инъекции.

Если яйцеклетка имела стадию MII, почему она не пережила ИКСИ?

Стадия MII подтверждает ядерную зрелость, но не показывает все внутренние свойства клетки. Цитоплазматическая зрелость, состояние мембраны и энергетические возможности ооцита могут отличаться.

Можно ли повторно ввести сперматозоид в дегенерировавший ооцит?

Нет. Подтверждённая дегенерация означает потерю жизнеспособности клетки.

Дегенерация означает, что сперматозоид был плохим?

Не обязательно. Немедленное повреждение чаще связано с реакцией ооцита на микроманипуляцию. Качество сперматозоида имеет большее значение для активации, оплодотворения и дальнейшего развития.

Возраст женщины является причиной дегенерации?

Возраст влияет на репродуктивный потенциал яйцеклеток, но по одному случаю нельзя утверждать, что повреждение произошло именно из-за возраста. Данные о прямой связи возраста с дегенерацией после ИКСИ неоднозначны.

Нужно ли менять клинику после одного повреждённого ооцита?

Обычно нет. Сначала необходимо узнать количество инъецированных клеток, процент дегенерации, результаты оплодотворения и объяснение эмбриолога. Поводом для более серьёзного анализа может быть высокая или повторяющаяся дегенерация.

Если одна яйцеклетка дегенерировала, остальные эмбрионы тоже слабые?

Не обязательно. Каждая клетка имеет собственные особенности. Оставшиеся яйцеклетки могут нормально оплодотвориться, сформировать бластоцисты и быть использованы для переноса или заморозки.

Может ли проблема повториться в следующем протоколе?

Может, но повторение не является обязательным. Прогноз зависит от причины, количества полученных клеток, особенностей нового цикла и лабораторной тактики.

Поможет ли другой эмбриолог?

Если дегенерация повторяется, лаборатория может сравнить результаты разных операторов и пересмотреть технические параметры. Однако смена специалиста не устранит биологическую хрупкость ооцитов, если причина связана с особенностями клеток.

Можно ли заранее определить хрупкость яйцеклетки?

Не всегда. Некоторые особенности становятся понятны только во время денудации или прохождения мембраны при ИКСИ.

Дегенерация и остановка развития эмбриона - одно и то же?

Нет. При дегенерации жизнеспособность теряет неоплодотворённая яйцеклетка. Остановка развития происходит позже, когда оплодотворение уже состоялось и началось деление эмбриона.

Краткий итог​

• Дегенерация означает потерю жизнеспособности яйцеклетки.
• Повреждение может быть обнаружено во время ИКСИ или при последующей проверке.
• Единичная дегенерация не доказывает ошибку эмбриолога.
• Причиной может быть хрупкость оолеммы, внутренняя незрелость ооцита, механическое воздействие или сочетание факторов.
• Процент считают от количества инъецированных яйцеклеток.
• При малом количестве ооцитов процент нужно оценивать особенно осторожно.
• Дегенерация отличается от отсутствия оплодотворения и обозначения 0PN.
• Дегенерировавшую яйцеклетку восстановить или повторно оплодотворить нельзя.
• Одна повреждённая клетка не определяет качество всех остальных ооцитов.
• Повторяющаяся или высокая дегенерация требует подробного разбора протокола.

Похожие материалы​

• Почему сперматозоиды есть, но оплодотворения не происходит?
• Активация ооцитов после ИКСИ: когда её применяют?
• Как правильно читать эмбриологический лист после ЭКО?
• Оценка качества бластоцист по системе Гарднера

Заключение​

Дегенерация яйцеклетки после ИКСИ может быть связана с хрупкостью мембраны, внутренними особенностями ооцита, его зрелостью, процессом денудации или техническими обстоятельствами проведения процедуры. Если повредилась одна клетка, это ещё не говорит о плохом качестве всех яйцеклеток или неправильной работе эмбриолога. Результат необходимо оценивать с учётом количества зрелых MII, числа инъецированных ооцитов, процента дегенерации, нормального оплодотворения 2PN и развития оставшихся эмбрионов. При повреждении значительной части клеток или повторении ситуации в нескольких протоколах стоит запросить эмбриологический лист и подробный разбор каждого этапа.

Сколько яйцеклеток получили у вас, сколько было зрелых MII, скольким провели ИКСИ и сколько ооцитов дегенерировало? Напишите свою ситуацию на форуме EcoTopLab. Участники смогут поделиться похожим опытом, а специалисты помогут правильно рассчитать процент и подготовить вопросы эмбриологу.

Материал носит информационный характер и не заменяет консультацию репродуктолога или эмбриолога. Причину дегенерации нельзя установить только по количеству повреждённых яйцеклеток - необходим анализ полного эмбриологического протокола.

Редакция - EcoTopLab

Вы должны Войти или Регистрация, чтобы просмотреть скрытое содержимое на этой странице.