ИКСИ с замороженными яйцеклетками: зачем оно нужно?

ИКСИ с замороженными яйцеклетками: почему после разморозки применяют именно этот метод?​

Если для программы ЭКО используются ранее замороженные яйцеклетки, после разморозки их обычно оплодотворяют методом ИКСИ. Это делают даже тогда, когда спермограмма партнёра нормальная и выраженного мужского фактора нет. Причина не в том, что замороженные яйцеклетки обязательно становятся «плохими». Дело в особенностях подготовки ооцитов к витрификации и возможных изменениях их оболочек после замораживания и размораживания. Перед витрификацией с яйцеклетки обычно удаляют окружающие её клетки, чтобы эмбриолог мог определить зрелость ооцита. После разморозки такая яйцеклетка уже не находится в привычном комплексе клеток, участвующих в естественном взаимодействии со сперматозоидами. При ИКСИ эмбриолог вводит один выбранный сперматозоид непосредственно внутрь зрелого ооцита. Благодаря этому сперматозоиду не требуется самостоятельно проходить через окружающие клетки и оболочку яйцеклетки. Поэтому ИКСИ стало наиболее отработанным способом оплодотворения размороженных ооцитов. Однако метод не восстанавливает повреждённую яйцеклетку, не улучшает её хромосомный набор и не гарантирует получение эмбриона.

Что означает «разморозка яйцеклеток»?​

В повседневной речи обычно говорят «заморозка» и «разморозка». В эмбриологии чаще используют термины «витрификация» и «отогрев». Витрификация - это очень быстрое охлаждение яйцеклетки с применением специальных защитных растворов. Такой подход позволяет свести к минимуму образование кристаллов льда, способных повредить клетку. Во время отогрева яйцеклетку последовательно проводят через специальные растворы. Это необходимо, чтобы удалить криопротекторы и постепенно восстановить нормальное содержание воды внутри клетки. После завершения процедуры эмбриолог оценивает состояние ооцита. Только яйцеклетки, сохранившие целостность и признаки жизнеспособности, могут использоваться для дальнейшего оплодотворения.

Почему яйцеклетки замораживают без окружающих клеток?​

После пункции яйцеклетка находится не одна. Её окружает слой клеток, который называется кумулюсом. Самый близкий к оболочке ооцита слой называют лучистым венцом, или corona radiata. Эти клетки участвуют во взаимодействии яйцеклетки со сперматозоидами при обычном ЭКО. Но они мешают эмбриологу точно оценить зрелость самого ооцита. Перед витрификацией клетки кумулюса обычно удаляют. После этого эмбриолог может увидеть, достигла ли яйцеклетка зрелой стадии MII.
Именно зрелые ооциты MII чаще всего отбирают для витрификации, потому что они уже готовы к оплодотворению. После удаления клеток кумулюса яйцеклетка становится полностью доступной для оценки, но обычный путь взаимодействия со сперматозоидами изменяется. Это одна из причин, по которой после разморозки предпочитают проводить ИКСИ.

Меняется ли оболочка яйцеклетки после замораживания?​

Яйцеклетку окружает прозрачная оболочка - zona pellucida. При обычном ЭКО сперматозоид должен связаться с этой оболочкой, пройти через неё и проникнуть внутрь ооцита. Предполагается, что витрификация и отогрев могут влиять на свойства прозрачной оболочки и клеточной мембраны ооцита. Из-за этого самостоятельное проникновение сперматозоида теоретически может затрудняться. Иногда это объясняют фразой «после заморозки оболочка становится твёрдой». Такое объяснение слишком упрощённое.

Нельзя утверждать, что оболочка обязательно затвердевает у каждой размороженной яйцеклетки. На результат могут одновременно влиять:

• отсутствие клеток кумулюса;
• особенности витрификации;
• возможные изменения прозрачной оболочки;
• состояние мембраны ооцита;
• индивидуальные свойства самой яйцеклетки;
• протокол отогрева;
• время между отогревом и оплодотворением;
• опыт эмбриолога.

ИКСИ позволяет не рассчитывать на самостоятельное прохождение сперматозоида через оболочку: этот этап выполняет эмбриолог.

Как проводят ИКСИ после разморозки яйцеклеток?​

Работа лаборатории проходит в несколько последовательных этапов.

1. Отогрев ооцитов. Яйцеклетки извлекают из криохранилища и проводят через растворы, предусмотренные протоколом отогрева.
2. Оценка выживания. Эмбриолог проверяет, сохранилась ли целостность яйцеклетки.
3. Период восстановления. Ооцит помещают в питательную среду. ИКСИ не обязательно выполняют в ту же секунду: точное время определяется протоколом лаборатории.
4. Подготовка спермы. Эмбриолог обрабатывает свежий или размороженный образец и отбирает подходящие сперматозоиды.
5. Проведение ИКСИ. Один выбранный жизнеспособный сперматозоид вводят внутрь зрелой яйцеклетки.
6. Культивирование. Ооцит помещают в инкубатор в контролируемые условия.
7. Проверка оплодотворения. На следующий день эмбриолог оценивает появление признаков нормального оплодотворения.

Даже если яйцеклетка пережила отогрев, это ещё не означает, что она обязательно перенесёт ИКСИ, нормально оплодотворится и продолжит развитие.

Почему нельзя просто добавить сперматозоиды к размороженным яйцеклеткам?​

Технически обычное оплодотворение ЭКО размороженных ооцитов возможно. При таком способе яйцеклетки помещают в питательную среду вместе с подготовленными сперматозоидами.

Но для успешного обычного ЭКО сперматозоиду необходимо самостоятельно:

• взаимодействовать с окружающими яйцеклетку структурами;
• связаться с прозрачной оболочкой;
• пройти через оболочку;
• соединиться с мембраной ооцита;
• запустить процесс активации яйцеклетки.

Большинство зрелых ооцитов замораживают после удаления клеток кумулюса. Кроме того, криоконсервация может изменить свойства оболочек яйцеклетки. ИКСИ обходит этап самостоятельного проникновения сперматозоида и поэтому считается более предсказуемым лабораторным подходом. Однако правильнее говорить не «обычное ЭКО невозможно», а «ИКСИ является наиболее распространённым и изученным способом оплодотворения размороженных ооцитов». Прямых сравнительных данных между двумя способами пока недостаточно.

Нужно ли ИКСИ, если спермограмма нормальная?​

Да, при использовании размороженных яйцеклеток ИКСИ часто проводят даже при нормальных показателях спермы. В этой ситуации основанием становится не обязательно мужской фактор, а сам факт использования ранее витрифицированных ооцитов. При обычной свежей программе ЭКО и нормальной сперме рутинное ИКСИ требуется не всегда. Но размороженные яйцеклетки представляют отдельную эмбриологическую ситуацию. Тем не менее перед процедурой сперму всё равно необходимо подготовить. Эмбриолог оценивает количество, подвижность и пригодность сперматозоидов для инъекции.

Какие яйцеклетки можно оплодотворять методом ИКСИ?​

Стандартное ИКСИ проводят со зрелыми яйцеклетками на стадии MII. Зрелость ооцита определяют по наличию первого полярного тельца и другим эмбриологическим признакам. Если яйцеклетка была незрелой на момент замораживания, возможность её использования зависит от стадии развития и протокола лаборатории. Не каждый размороженный незрелый ооцит сможет дозреть и стать пригодным для ИКСИ.

Поэтому в документах необходимо различать:

• сколько яйцеклеток разморозили;
• сколько пережило отогрев;
• сколько оказалось зрелыми;
• скольким провели ИКСИ;
• сколько нормально оплодотворилось.

Эти цифры могут отличаться. Например, выживание после разморозки и нормальное оплодотворение - это два разных этапа.

Гарантирует ли ИКСИ оплодотворение размороженной яйцеклетки?​

Нет. ИКСИ помогает доставить сперматозоид внутрь ооцита, но после инъекции должны самостоятельно произойти сложные клеточные процессы. Яйцеклетка должна активироваться, завершить необходимые этапы созревания и сформировать нормальную зиготу.

Оплодотворение может не произойти по разным причинам:

• ооцит не полностью восстановился после отогрева;
• были нарушены внутренние структуры яйцеклетки;
• не произошла активация ооцита;
• сперматозоид имел функциональные нарушения;
• не сформировались нормальные пронуклеусы;
• произошло аномальное оплодотворение;
• яйцеклетка не перенесла микроманипуляцию;
• после оплодотворения не началось правильное деление.

Поэтому фраза «сперматозоид ввели внутрь» не означает, что оплодотворение уже гарантировано.

Может ли размороженная яйцеклетка повредиться во время ИКСИ?​

Такой риск существует. Для введения сперматозоида эмбриолог проходит специальной микропипеткой через оболочку и мембрану ооцита. Размороженная яйцеклетка может отличаться по чувствительности мембраны и цитоплазмы. В отдельных случаях после инъекции происходит дегенерация ооцита.

Риск зависит от нескольких факторов:

• исходного качества яйцеклетки;
• возраста женщины на момент получения ооцитов;
• метода витрификации и отогрева;
• состояния мембраны после разморозки;
• соблюдения температуры и кислотности среды;
• времени проведения процедуры;
• технического опыта эмбриолога.

Сам факт повреждения после инъекции не всегда позволяет точно определить одну причину. На состояние ооцита могли одновременно повлиять его исходное качество, витрификация, отогрев и ИКСИ.

Улучшает ли ИКСИ качество размороженной яйцеклетки?​

Нет. ИКСИ является способом оплодотворения, а не методом восстановления ооцита.

Процедура не может:

• устранить хромосомные нарушения;
• омолодить яйцеклетку;
• исправить повреждённые внутренние структуры;
• сделать нежизнеспособный ооцит жизнеспособным;
• гарантировать правильное деление эмбриона;
• обеспечить развитие до бластоцисты;
• гарантировать имплантацию и беременность.

Главное преимущество ИКСИ заключается в том, что сперматозоиду не требуется самостоятельно преодолевать оболочку яйцеклетки. Все последующие процессы зависят от биологических свойств обеих половых клеток.

От чего зависит результат при использовании замороженных ооцитов?​

На итог программы влияет не один показатель, а вся последовательность этапов.

Особое значение имеют:

• возраст женщины в день получения и замораживания яйцеклеток;
• количество сохранённых зрелых ооцитов;
• исходное качество яйцеклеток;
• метод витрификации;
• качество работы криолаборатории;
• соблюдение протокола отогрева;
• доля яйцеклеток, переживших отогрев;
• характеристики сперматозоидов;
• правильность проведения ИКСИ;
• условия культивирования эмбрионов;
• способность эмбрионов развиваться до нужной стадии.

Очень важен возраст именно на момент замораживания яйцеклеток. Если ооциты были получены несколько лет назад, их биологический возраст соответствует возрасту женщины во время пункции, а не возрасту на день разморозки.

Влияет ли срок хранения яйцеклеток на результат ИКСИ?​

При соблюдении условий криохранения яйцеклетки находятся при крайне низкой температуре, и обычные клеточные процессы практически останавливаются. Само по себе хранение в течение нескольких лет не означает, что каждый год яйцеклетки продолжают стареть так же, как в организме женщины.

Для прогноза обычно важнее:

• возраст женщины при получении ооцитов;
• зрелость яйцеклеток перед витрификацией;
• качество замораживания;
• стабильность условий хранения;
• качество процедуры отогрева.

Точный прогноз нельзя определить только по количеству лет хранения.

Если яйцеклетка пережила разморозку, значит ли это, что она качественная?​

Нет. Выживание после отогрева означает, что эмбриолог видит сохранённую целостность клетки и считает возможным продолжить работу.

Но внешняя сохранность не позволяет полностью оценить:

• хромосомный набор яйцеклетки;
• состояние веретена деления;
• работу клеточных механизмов активации;
• способность к нормальному оплодотворению;
• вероятность развития до бластоцисты;
• генетический статус будущего эмбриона.

Поэтому между разморозкой и получением эмбриона существует естественное уменьшение количества материала: не все ооциты выживают, не все оплодотворяются и не все полученные эмбрионы продолжают развитие.

Можно ли одновременно использовать замороженные яйцеклетки и замороженную сперму?​

Да. Замороженные яйцеклетки можно оплодотворять размороженной спермой партнёра или донора. Перед ИКСИ образец спермы размораживают, обрабатывают и оценивают. Для инъекции необходимо найти жизнеспособные сперматозоиды.
Если ожидается очень малое количество подходящих сперматозоидов, клиника должна заранее согласовать план действий. Особенно это важно при использовании сперматозоидов, полученных хирургическим способом, или при наличии тяжёлого мужского фактора.

Нужны ли PICSI или IMSI при размороженных яйцеклетках?​

Витрификация ооцитов сама по себе не является автоматическим показанием к PICSI или IMSI. ИКСИ - это способ введения сперматозоида внутрь яйцеклетки. PICSI и IMSI относятся к дополнительным подходам, связанным с выбором сперматозоидов.

Необходимость таких методов должна оцениваться отдельно с учётом:

• показателей спермы;
• результатов предыдущих программ;
• причин отсутствия или низкой частоты оплодотворения;
• качества развития эмбрионов;
• возможностей конкретной лаборатории.

Формула «яйцеклетки заморожены - значит обязательно нужны ИКСИ, PICSI и IMSI одновременно» неверна.

Можно ли после ИКСИ провести ПГТ эмбрионов?​

Да. Если после оплодотворения размороженных ооцитов эмбрионы развились до подходящей стадии, в некоторых программах может проводиться преимплантационное генетическое тестирование. Но ИКСИ и ПГТ решают разные задачи.
ИКСИ помогает сперматозоиду попасть внутрь яйцеклетки. ПГТ исследует определённые генетические характеристики уже полученного эмбриона. Необходимость ПГТ определяют не по факту заморозки яйцеклеток, а по медицинским показаниям и целям конкретной программы.

Что спросить у эмбриолога перед разморозкой яйцеклеток?​

• Сколько яйцеклеток хранится в клинике?
• На какой стадии зрелости они были заморожены?
• Каким методом проводилась криоконсервация?
• Планируется разморозить все яйцеклетки или только часть?
• Почему в моей ситуации выбран именно метод ИКСИ?
• Как лаборатория оценивает выживание ооцита после отогрева?
• Через какое время после отогрева будет выполнено ИКСИ?
• Какая сперма будет использоваться - свежая или замороженная?
• Что будет сделано, если после подготовки окажется мало подходящих сперматозоидов?
• Какие сведения внесут в эмбриологический протокол?
• Когда сообщат количество выживших и нормально оплодотворившихся яйцеклеток?
• До какого дня планируется культивирование эмбрионов?
• Что будет сделано с оставшимися эмбрионами?

FAQ​

Почему после разморозки яйцеклеток делают ИКСИ, если мужского фактора нет?

Потому что ИКСИ считается наиболее отработанным способом оплодотворения размороженных ооцитов. Обычно яйцеклетки замораживают после удаления клеток кумулюса, а витрификация может влиять на свойства их оболочек.

Правда ли, что после заморозки оболочка яйцеклетки становится слишком твёрдой?

Это распространённое, но упрощённое объяснение. Возможные изменения оболочки рассматриваются как одна из причин выбора ИКСИ, однако они происходят не обязательно у каждого ооцита. Большое значение имеет также удаление клеток кумулюса.

Можно ли оплодотворить размороженную яйцеклетку обычным методом ЭКО?

Технически это возможно, но сравнительных данных недостаточно. В клинической практике ИКСИ остаётся наиболее распространённым и отработанным способом оплодотворения размороженных ооцитов.

Все ли размороженные яйцеклетки подходят для ИКСИ?

Нет. Сначала эмбриолог оценивает выживание и зрелость ооцитов. Стандартное ИКСИ проводят с жизнеспособными зрелыми яйцеклетками.

ИКСИ проводят сразу после разморозки?

Обычно после отогрева яйцеклеткам дают время для восстановления в питательной среде. Точный интервал зависит от протокола лаборатории. Слишком долгое ожидание также нежелательно, поэтому процедура должна быть чётко организована.

Может ли яйцеклетка пережить разморозку, но не пережить ИКСИ?

Да. Ооцит может выглядеть сохранившимся после отогрева, но затем повредиться во время инъекции или дегенерировать после неё.

Если сперматозоид ввели внутрь, почему оплодотворение может не произойти?

После инъекции яйцеклетка должна активироваться и правильно завершить несколько клеточных процессов. ИКСИ преодолевает только этап проникновения сперматозоида, но не контролирует все дальнейшие события.

ИКСИ повышает качество будущего эмбриона?

Само по себе ИКСИ не улучшает качество яйцеклетки и не исправляет хромосомные нарушения. Метод помогает провести оплодотворение, но дальнейшее развитие зависит от свойств ооцита и сперматозоида.

Если разморозили десять яйцеклеток, получится десять эмбрионов?

Нет. Часть ооцитов может не пережить отогрев, часть - не оплодотвориться, а некоторые эмбрионы могут остановиться в развитии. Количество размороженных яйцеклеток нельзя приравнивать к количеству будущих эмбрионов.

Можно ли разморозить только часть яйцеклеток?

Иногда это возможно. Решение зависит от общего количества ооцитов, возраста женщины на момент их замораживания, репродуктивного плана и протокола клиники. Этот вопрос необходимо обсудить заранее.

Возраст женщины на день разморозки влияет на качество яйцеклеток?

Для самих ооцитов основное значение имеет возраст женщины на момент их получения и замораживания. Однако текущий возраст и состояние здоровья могут иметь значение для подготовки к переносу и ведения беременности.

Нужна ли искусственная активация ооцитов после ИКСИ?

Рутинно её не проводят. Дополнительную активацию могут обсуждать после полного или очень низкого оплодотворения в предыдущих программах либо при отдельных формах тяжёлого мужского фактора.

Краткий итог​

• После разморозки яйцеклеток обычно применяют ИКСИ.
• Перед витрификацией с ооцитов чаще всего удаляют клетки кумулюса, чтобы оценить их зрелость.
• Криоконсервация может влиять на свойства оболочки и мембраны яйцеклетки.
• ИКСИ позволяет обойти этап самостоятельного проникновения сперматозоида через оболочку.
• Нормальная спермограмма не исключает применение ИКСИ при размороженных ооцитах.
• Обычное ЭКО технически возможно, но ИКСИ остаётся наиболее отработанным подходом.
• Для ИКСИ подходят не все размороженные ооциты, а только жизнеспособные зрелые яйцеклетки.
• ИКСИ не улучшает качество ооцита и не гарантирует нормальное оплодотворение.
• На прогноз особенно влияют возраст женщины на момент замораживания, количество зрелых ооцитов и качество работы лаборатории.

Похожие материалы​

• Почему сперматозоиды есть, но оплодотворения не произошло?
• Активация ооцитов после ИКСИ: когда она действительно нужна?
• Замороженная или свежая сперма для ИКСИ: есть ли разница?
• Эмбрион не пережил разморозку: почему это происходит?

Заключение​

ИКСИ после разморозки яйцеклеток применяют не только при плохой спермограмме. В этой ситуации выбор метода связан прежде всего с особенностями самих витрифицированных ооцитов. Перед замораживанием яйцеклетки обычно освобождают от клеток кумулюса. После отогрева также возможны изменения свойств оболочки и мембраны ооцита. Поэтому лаборатория не полагается на способность сперматозоида самостоятельно пройти все оболочки, а вводит его непосредственно внутрь клетки. При этом ИКСИ решает только одну задачу - помогает сперматозоиду попасть в яйцеклетку. Метод не может восстановить повреждённый ооцит, исправить хромосомные нарушения или гарантировать образование эмбриона. Поэтому после разморозки важно узнать не только количество выживших яйцеклеток, но и сколько из них оказалось зрелыми, скольким провели ИКСИ, сколько нормально оплодотворилось и как развивались полученные эмбрионы.

Использовали ли в вашей программе собственные или донорские замороженные яйцеклетки? Напишите на форуме: ваш возраст на момент замораживания ооцитов, сколько яйцеклеток хранилось, сколько разморозили, сколько пережило отогрев и сколько нормально оплодотворилось после ИКСИ. Участницы поделятся опытом, а специалисты помогут понять эмбриологический протокол и подготовить вопросы для клиники.

Редакция - EcoTopLab

Вы должны Войти или Регистрация, чтобы просмотреть скрытое содержимое на этой странице.